Tách chiết DNA bằng phương pháp cột silica

Tách chiết DNA bằng phương pháp cột silica là một giải pháp tách chiết tối ưu được sử dụng khá phổ biến trong các phòng nghiên cứu và xét nghiệm hiện nay bởi nhiều ưu điểm như: thu nhận DNA với độ tinh sạch tương đối cao, quy trình linh động, có thể thực hiện trên nhiều nền mẫu khác nhau… 

Bài viết lần này chúng tôi muốn giới thiệu đến quý khách hàng và bạn đọc về nguyên lý hoạt động, các bước thực hiện cơ bản của phương pháp này và một giải pháp tách chiết DNA cột silica thương mại. 

Hãy cùng chúng tôi tham khảo bài viết dưới đây nhé.

Nguyên lý hoạt động

Tách chiết DNA bằng phương pháp cột silica là một dạng tách chiết pha rắn để tinh sạch DNA một cách nhanh chóng. Trong điều kiện các môi trường đệm khác nhau, DNA sẽ liên kết với màng silica và được giữ lại, còn các thành phần không mong muốn khác được loại bỏ bằng cách ly tâm.

Các bước thực hiện cơ bản

Quy trình tách chiết DNA thông thường gồm bốn bước cơ bản: ly giải, gắn cột, rửa và dung giải. 

Ly giải

Đầu tiên, DNA sẽ được giải phóng ra khỏi tế bào nhờ các dung dịch đệm ly giải có chứa các muối chaotropic (guanidine hydrochloride, guanidine thiocyanate…), hóa chất biến tính và chất tẩy kết hợp với protease. 

Gắn cột

Sau khi biến tính phá vỡ cấu trúc, dịch nổi DNA sạch được trộn với dung dịch đệm gắn cột và alcohol (ethanol/ isopropanol) để tạo các điều kiện tối ưu cho sự liên kết của DNA với màng silica. Alcohol được thêm vào giai đoạn này để tăng cường khả năng gắn của DNA lên màng silica, giúp loại bỏ các thành phần khác của tế bào và hóa chất ly trích ở bước ly giải. Nồng độ alcohol sẽ được tối ưu hóa để đảm bảo DNA không bị ảnh hưởng trong quá trình ly trích. 

Rửa

Để loại bỏ các thành phần có thể gây ức chế phản ứng PCR như protein, các chất nội bào….cột silica sẽ được rửa với hai dung dịch đệm khác nhau để loại bỏ hầu hết chúng và nhằm để thu được dung dịch DNA với hiệu suất cao và tinh sạch. Dung dịch rửa lần một thường chứa một lượng nhỏ muối chaotropic nhằm loại bỏ protein và các chất màu. Dung dịch rửa lần hai là rửa bằng ethanol để loại bỏ muối  để tăng hàm lượng và độ tinh sạch của DNA.

Dung giải

Bước cuối cùng là giải phóng DNA ra khỏi màng silica. DNA có thể được dung giải trong các dung dịch có nồng độ muối thấp, thường dùng là dung dịch muối Tris 10 mM ở pH 8- 9  và sẵn sàng được sử dụng ngay cho các phản ứng PCR.

Giải pháp tách chiết bằng cột silica

Để tiết kiệm thời gian cũng như giảm sai sót trong quá trình tách chiết, ngày nay đã có rất nhiều công ty tiến hành thương mại hóa các bộ kit (hóa chất) tách chiết. Tất cả các hóa chất cần thiết để tách chiết như dung dịch ly giải, rửa, dung giải …sẽ được nhà sản xuất pha chế sẵn và cho vào trong các ống chứa phản ứng nhỏ. Do đó, nhiệm vụ của người làm xét nghiệm là cho mẫu bệnh phẩm vào để thu nhận DNA tinh sạch một cách nhanh chóng. 

AccuRive sDNA Prep Kit là một bộ kit tách chiết bằng phương pháp cột silica được sản xuất bởi hãng Khoa Thương – Việt Nam. Bộ kit này sử dụng công nghệ cột silica cho phép tinh sạch nhanh và hiệu quả các DNA từ tế bào bạch cầu, mẫu mô sinh thiết hay DNA virus từ các mẫu huyết thanh, huyết tương, dịch tế bào, dịch mô đồng nhất, dịch lỏng nhằm cung cấp đủ hàm lượng DNA chất lượng cho các xét nghiệm bằng PCR phát hiện mầm bệnh. 

Thành phần của bộ kit này gồm có: 

Cách thực hiện: Đối với phương pháp tách chiết này, thành phần guanidine hydrochloride có trong dung dịch ly giải sẽ phá vỡ cấu trúc protein của tế bào, biến tính protein cung như bất hoạt các enzyme phân hủy DNA có trong hỗn hợp. Sau đó, DNA sẽ được hấp phụ đặc hiệu lên màng silica khi hỗn hợp ly giải được đưa vào cột lọc, dưới sự hỗ trợ của ethanol hoặc isopropanol. Kế tiếp, màng lọc sẽ được rửa 2 – 3 lần bằng các dung dịch rửa để làm sạch DNA đã gắn lên màng. Cuối cùng, DNA sạch được dung giải khỏi màng nhờ dung dịch bảo quản để ứng dụng cho các phản ứng PCR sau đó. 

Bộ kit này với thiết kế màng silica cùng hệ đệm được tối ưu giúp thu hồi chọn lọc DNA hiệu suất cao và hạn chế bám lại các tạp chất. Ngoài ra, bộ kit còn có ưu điểm là loại bỏ được các hóa chất độc hại và thời gian chuẩn bị ngắn. 

Trên đây là một số kiến thức liên quan đến phương pháp tách chiết DNA bằng cột silica mà NKTBIO chúng tôi muốn chia sẻ đến với các bạn.

Nếu bạn cần thêm thông tin về sản phẩm hoặc cần tư vấn thì hãy liên hệ ngay với chúng tôi để được hỗ trợ nhanh nhất:

Công ty TNHH Khoa học NKTBIO
VPGD: Số 60, đường số 13, Khu Dân cư Bình Hưng, xã Bình Hưng, huyện Bình Chánh, TPHCM
Hotline: 028.3636.5898
Email: info@nktbioco.com