Bệnh do Cytomegalovirus (CMV) và phát hiện bệnh bằng kỹ thuật Real-time PCR

Bệnh do virus Cytomegalo là bệnh nhiễm trùng gây bệnh cho mọi độ tuổi đặc biệt ở những đối tượng là phụ nữ mang thai, trẻ em và người có hệ miễn dịch kém hoặc suy giảm hệ miễn dịch. Bệnh do virus Cytomegalo tồn tại lâu dài trong cơ thể và dễ lây lan sang cộng đồng.

Căn bệnh này đáng sợ như thế nào, nguyên nhân gây bệnh, triệu chứng và cách phát hiện bệnh ra sao… sẽ được chúng tôi đề cập trong bài viết lần này. Hãy tham khảo bài viết bên dưới đây nhé! 

Bệnh do Cytomegalovirus là gì? 

Cytomegalovirus là virus chứa DNA mạch kép, dạng thẳng, kích thước khoảng 236kp, thuộc họ Herpesviridae, trong phân họ Betaherpesvirinae. Cytomegalovirus cùng họ với các virus: Epstein-Barr, Herpes và Varicella. Hệ gen virus cytomegalo chia thành hai vùng: một vùng dài (UL), và một vùng ngắn. Trong nhân tế bào, virus cytomegalo nhân lên tạo thành các hạt vùi lớn. Còn ở bào tương thì tạo ra nhiều hạt vùi có kích thước nhỏ hơn. Đặc biệt, virus cytomegalo có thể nhân lên ở nhiều tế bào trong cơ thể như: tế bào gan, thận, phổi, tuyến nước bọt, tế bào lymphocyte.

Bệnh do Cytomegalovirus có thể gặp ở bất kỳ nơi nào trên thế giới. Tại Mỹ, Tây Âu có ít nhất 60% – 70% dân số phơi nhiễm với virus Cytomegalo; và hơn 80% ở các nước Châu Phi. Tại các nước đang phát triển, hầu hết tình trạng nhiễm trùng mắc phải ở trẻ nhỏ và người lớn cho kết quả dương tính với huyết thanh chẩn đoán virus.

Hầu hết các trường hợp không có biểu hiện lâm sàng. Một số trường hợp nhiễm Cytomegalovirus lành tính, bệnh thường gây ra các triệu chứng như: sốt, yếu cơ, mệt mỏi, sưng hạch ngoại vi, hạch nội tạng, gan lách to, và kèm theo tổn thương trên da. 

Giải pháp phát hiện bệnh bằng kỹ thuật real-time PCR

AccuPid CMV Quantification Kit của hãng sản xuất Khoa Thương được sử dụng trong xét nghiệm định lượng DNA của cytomegalovirus (CMV) trong huyết thanh người. Xét nghiệm này được sử dụng trước và trong suốt quá trình điều trị nhằm đánh giá mức độ đáp ứng thuốc ở bệnh nhân. Xét nghiệm này định tính dựa trên kỹ thuật real-time PCR sử dụng mẫu dò Taqman cho phép phát hiện nhanh và chính xác virus cytomegalovirus trong các mẫu bệnh phẩm. Kit có ưu điểm là dễ thực hiện, độ đặc hiệu, độ nhạy cao; có chứng nội ngoại sinh và các đối chứng khác để kiểm soát khả năng dương tính giả, âm tính giả.

Quy trình thực hiện gồm 4 bước cơ bản như:

Bước 1: Chuẩn bị mẫu (huyết thanh)

Bước 2: Tách chiết DNA

Bước 3: Nhân bản vùng trình tự mục tiêu bằng hệ mồi đặc hiệu và thu nhận tín hiệu huỳnh quang bằng thiết bị real-time PCR.

Bước 4: Phân tích kết quả

Quá trình có thể hoàn tất trong khoảng 3 – 4 giờ.

Chuẩn bị mẫu

Mẫu máu toàn phần được ly tâm phân đoạn để thu lấy huyết thanh.

Tách chiết DNA

DNA trong mẫu bệnh phẩm được tách chiết và tinh sạch nhằm loại bỏ các chất gây ức chế phản ứng PCR. Các phương pháp tách chiết DNA thường bao gồm bước biến tính protein; cố định DNA và rửa trôi các chất ức chế; và thu nhận DNA tinh sạch. Các chất gây biến tính protein sẽ phá vỡ cấu trúc các protein trên tế bào người và vi khuẩn, virus, nấm,…từ đó làm vỡ tế bào và giải phóng DNA bộ gen. Sau đó, DNA được giữ lại trên các giá thể phù hợp và loại bỏ chất gây ức chế bằng các dung dịch rửa giải. Cuối cùng, DNA tinh sạch được thu hồi bằng cách hòa tan DNA trong dung dịch bảo quản.

Nhân bản và phát hiện

Phản ứng PCR

Đầu tiên, nhiệt độ phản ứng được nâng cao làm các phân tử DNA bị biến tính thành dạng mạch đơn và hoạt hóa enzyme Taq DNA polymerase. Khi ống phản ứng được làm mát, các đoạn mồi đến bắt cặp với vùng gen mục tiêu. Nhờ có sự hiện diện của ion Mg2+ và các deoxynucleotide triphosphate (dNTP) ở nồng độ cao, Taq DNA polymerase sẽ kéo dài mồi để tạo nên các phân tử DNA mạch đôi gọi là amplicon. Việc tăng và giảm nhiệt độ của phản ứng được máy luân nhiệt lặp lại theo số chu kỳ đã định trước. 

Phát hiện sản phẩm

Với việc sử dụng mẫu dò đánh dấu huỳnh quang (mẫu dò Taqman), sự gia tăng số lượng sản phẩm PCR có thể được theo dõi theo thời gian thực (real-time) bằng cách đo mật độ tín hiệu huỳnh quang phát ra trong suốt quá trình PCR. Khi mẫu dò vẫn còn nguyên vẹn, tín hiệu huỳnh quang phát ra bởi reporter sẽ bị quencher thu hút. Khi phản ứng PCR xảy ra, mẫu dò bắt cặp với vùng gen mục tiêu nằm giữa 2 mồi và bị phân cắt bởi hoạt tính 5’ – 3’ exonuclease của Taq DNA polymerase. Lúc này, phân tử reporter và quencher được tách nhau ra và tín hiệu huỳnh quang thu được từ reporter trở nên mạnh hơn. 

Phân tích kết quả

Sự có mặt hay vắng mặt của DNA mục tiêu được xác định dựa trên sự có hay không có sản phẩm PCR thông qua việc quan sát tín hiệu huỳnh quang trên thiết bị.

Tóm lại, hầu hết người nhiễm virus Cytomegalovirus không có triệu chứng, cần được theo dõi, điều trị tập trung chỉ vào người suy giảm miễn dịch.

Nguồn: Tổng hợp

Nếu bạn cần hỗ trợ, tư vấn hoặc đặt mua sản phẩm thì hãy liên hệ ngay với chúng tôi:
Công ty TNHH Khoa học NKTBIO
VPGD: Số 60, đường số 13, khu Dân cư Bình Hưng, xã Bình Hưng, huyện Bình Chánh, TPHCM.
Hotline: 028.3636.5898
Email: info@nktbioco.com